Biocoll細胞分離液是最早由德國Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細胞外,更常用于胰島細胞的分離。胰島細胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法,可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細胞不足及功能低下的問題。
Biocoll細胞分離液分離方法會影響胰島的產率和存活率:
因此,取材時需要注意
1.胰臟應快速取材,保持包膜完整。
2.對胰臟進行評估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。
3.消化過程不宜進行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。
4.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過頭,否則會影響胰島純化的產率。
Biocoll細胞分離液操作步驟及注意:
1.取全血,使用等量PBS稀釋。(全血:HBSS=1:1)
2.取離心管,加入與血稀釋液等量的PBS于管底,將血液稀釋液小心加至PBS液面上層。(小心不要使兩種溶液混合,吸頭接近液面,貼壁緩慢加入,尤其是兩種溶液剛接觸到的時候,一定要慢!慢!再慢!)
3.離心:800g,30min,需要將制動降至低,即離心機自然降速至0,離心完畢將得到如圖所示分層(一定要自然降速,或者只有1-2成的制動)
4.吸取白膜層至新15mL離心管中。
5.白膜層液體加10~15mlPBS離心,300g,10min,棄上清。沉淀再加PBS清洗一次,棄上清。
6.沉淀加入正常培養的*培養基進行培養,2~3小時,使單核細胞貼壁。
7.鏡下觀察細胞貼壁后,更換培養基,去除未貼壁細胞,保留下來的即為所需的單核細胞。