逆轉錄病毒的研究,除了細胞學研究,還需要大量的分子生物學研究,因此,對于實驗室的衛生要救也更高。德國MB公司生產的PCR Clean
為了順利感染宿主細胞,逆轉錄病毒必須將其逆轉錄RNA基因組的DNA拷貝整合到宿主染色體中。因此,核膜(NE)是防止逆轉錄病毒感染的屏障。大多數逆轉錄病毒依靠有絲分裂NE分解進入細胞核,因此只感染增殖細胞。然而,慢病毒,如HIV-1,是例外的,因為它們感染具有完整NEs的非分裂細胞。在該過程中,通過核孔復合物(npc)是很重要的的步驟。
NPCs的質量約為100 MDa,并為核細胞質運輸提供通道由通透性屏障控制。核轉運受體(NTRs)能夠主動轉運,以便利的方式穿過NPCs,并在細胞核和細胞質之間循環。進口蛋白β超家族的成員代表了最大的NTR類。它們從rangtp系統中獲取能量,以rangtp控制的方式捆綁貨物,并將它們轉移到NPC的屏障上。NPC由大約30種不同的核孔蛋白(Nups)構建,包括大約10種所謂的FG-Nups,它們將屏障形成的苯丙氨酸-甘氨酸(FG)重復結構域錨定在NPC支架上。
FG結構域具有較低的序列復雜性,本質上是無序的,并且包含許多FG二肽基序,這些基序在易位過程中與NTRs結合。Nup98的FG結構域及其同源性的特殊之處在于它們出現在非常高的拷貝數中,并且在每個NPC中貢獻了最多的FG質量。它們具有最高的FG基序計數(約50個)和密度(約每12個殘基中有一個)。水是這些FG結構域的不良溶劑;因此,它們很容易從稀水溶液中相分離,形成蛋白質密度很高(約400mg ml?1)的FG相。由此產生的內聚FG相非常好地再現了核轉運選擇性,排除了惰性分子,如GFP或mCherry,同時允許具有非常高分配系數的NTR及其貨物復合物進入。此外,流動物種在黏合FG相中的分配系數是其NPC通過率的一個很好的預測指標,這兩個參數在四個數量級范圍內具有良好的相關性。因此,這種體外重建的FG相為研究NPC屏障的性質及其與NTRs的相互作用提供了方便的方法。
HIV-1感染需要病毒基因組的核進入。先前的證據表明,這種進入通過核孔復合物(NPC)進行,120 × 60 nm的衣殼通過約60 nm寬的中央通道擠壓1并穿過NPC的滲透性屏障。這種屏障可以被描述為FG相,它由粘合相互作用的苯丙氨酸-甘氨酸(FG)重復體組裝而成,并選擇性地滲透到核轉運受體(NTRs)捕獲的貨物中。
近日,科研人員發現HIV-1衣殼組裝可以以一種與ntr無關的方式有效地靶向npc,并直接結合幾種類型的FG重復序列,包括屏障形成的內聚重復序列。像NTRs一樣,衣殼很容易分裂成體外組裝的內聚FG相,可以作為NPC模擬物,不包括更小的惰性探針,如mCherry。事實上,衣殼組裝極大地增強了衣殼蛋白進入FG相的能力,這也允許被封裝的客戶端進入。因此,數據表明HIV-1衣殼的行為類似于NTR,其內部充當貨物集裝箱。由于用反式NTRs涂覆衣殼會使直徑增加10納米或更多,科研人員認為這種“自易位"衣殼破壞了NPC支架施加的尺寸限制,從而繞過了病毒感染的有效屏障。