核酸法檢測支原體的有點顯而易見:便捷、高效、準確率高、靈敏度高。核酸法分為普通PCR法和qPCR法。這兩種方法各有優缺點,也各有適應場景。
常規法PCR檢測試劑盒——Venor®GeM Classic
該試劑盒可以通過常規 PCR 對研究和工業中的細胞培養上清液、培養基和生物制藥中的支原體污染進行快速、可靠和省時的常規監測。
細胞培養物和培養基成分中的支原體(柔膜菌綱:支原體、無膽原體、螺旋體)物種都是通過高度保守的 rRNA 操縱子擴增來特異性檢測的,或者更具體地說,通過擴增支原體基因組中的 16S rRNA 編碼區來特異性檢測。在265-278 bp處檢測到支原體特異性擴增。通過使用提供的內擴增對照(在191 bp處檢測到),可以排除由于PCR抑制劑或DNA提取不當引起的假陰性結果。
優點:便捷成本低
缺點:無法定量
qPCR檢測試劑盒——Venor®GeM qEP
支原體熒光定量PCR法(qPCR):是在常規PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應的實時監測,簡稱qPCR。
優點:靈敏度高、特異性強、時間短,2-3小時出結果,檢測結果可定量,操作簡便
缺點:
對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會出現假陽性。(可用培養法做補充驗證)
不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大(由于引物及內在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專業人員推薦指導下使用。
『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹
德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒(均為探針法檢測),依據操作步驟的細微差別, 分『經典法』和『一步法』兩種。
此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品,具有以下優點:
①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應)。