外泌體(Exosome)是近年研究的熱點,它是新發現的一種細胞通訊的形式。外形上看,它是30-150nm的小囊泡,里面卻攜帶著多種蛋白質、RNA和脂類等重要信息。
它由活細胞分泌,進入到血清、唾液、尿液、羊水等多種生物體液中,進而影響鄰近或遠處的細胞。
圖. 外泌體作為一種小囊泡,參與細胞間的通訊。
圖片來自:Graça Raposo.Extracellular vesicles: Exosomes, microvesicles, and friends.J Cell Biol. 2013 Feb 18; 200(4): 373–383
胎牛血清是常用的細胞培養基添加成分,它富含多種營養,滿足細胞粘附、生長、增殖、解毒等需求。胎牛血清中也含有外泌體,并可能對所培養細胞具有一定作用。
2020年,有文獻報道了胎牛血清外泌體對成骨細胞的增殖起促進作用,則確證了血清中的外泌體確實在細胞培養中發揮一定的作用。(文獻1)
該實驗的研究設計如下:
一、外泌體的提取和確證
取15 mL胎牛血清,通過超速離心100000xg獲得外泌體,0.22μm過濾清洗后,將外泌體溶于100μlPBS中。并進行透射電子顯微鏡觀察,以及后期WB檢測標志蛋白確證。
二、細胞培養
小鼠胚胎成骨前體細胞MC3T3-E1細胞,前期用含10%胎牛血清的α-MEM培養液培養,傳代。選取狀態良好的第3代細胞用于后續實驗。
三、細胞分組培養
對照組:胎牛血清(不含外泌體)+ α-MEM
外泌體組:在以上基礎上另加入10 mg/L胎牛血清外泌體。
四、細胞檢測
用CCK-8檢測細胞增殖,WB檢測細胞骨形態發生蛋白2、骨橋蛋白。
結果顯示,24h后,外泌體組細胞增殖明顯高于對照組。同時,促進成骨的蛋白因子,如骨形態發生蛋白2和骨橋蛋白的表達水平明顯增高。
作者指出:胎牛血清外泌體對成骨細胞的增殖起到促進作用,可為臨床治療骨破壞提供新思路。同時,國外的研究表明,使用祛除外泌體的胎牛血清培養細胞,大多數細胞的生長速率均降低,提示血清中的外泌體在細胞生長及存活方面起到一定的作用(文獻2)。
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