現(xiàn)在,市面上能見到的顯色培養(yǎng)基大多用于食品和臨床,但HiMedia廠家生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基覆蓋面廣,能用于供水行業(yè)和環(huán)境監(jiān)測站。下面為您介紹一下。
顯色培養(yǎng)基的評價常有多個指標,如靈敏度,特異性等,它們也與所檢測的樣本類型有關。生產(chǎn)廠家經(jīng)常不提供這些指標。但一些第三方檢測中心或研究機構對此則有相關研究,并發(fā)表在專業(yè)期刊上。
2011年,《學術研究期刊》發(fā)表了一篇對顯色培養(yǎng)基的比較研究。作者來自埃及國家研究中心水污染研究部,他們通過用顯色培養(yǎng)基檢測了水中的大腸埃希氏菌O157:H7,對顯色培養(yǎng)基進行了評價(見參考文獻1)。
作者指出,在水中,E. coli O157:H7可以極低水平存在,伴隨大量競爭菌群。傳統(tǒng)方法需要超過48小時完成培養(yǎng),同時還需進一步的生化鑒定和血清學鑒定。依據(jù)原理主要是SMAC平板,在麥康凱瓊脂基礎上用山梨醇替代乳糖,E. coli O157:H7不能發(fā)酵山梨醇。該方法存在一定的偏差,因為有些E. coli O157:H7菌株可以發(fā)酵山梨醇。
顯色培養(yǎng)基的出現(xiàn)可改善這一檢測方法。研究者采用HiMedia公司生產(chǎn)的HiCrome EC O157:H7 Selective agar。因為存在特異性顯色底物,E. coli O157:H7菌落呈現(xiàn)深紫色,E. coli菌落則呈現(xiàn)淡粉色至淡紫色。
研究者收集了尼羅河地表水的60個水樣本。收集水平遵照了200年APHA發(fā)布的指南。所有水樣均收集在無菌的1L玻璃瓶中(Simax品牌,捷克共和國產(chǎn)),并在4℃條件下運輸?shù)綄嶒炇?。所有樣品在收集?小時內(nèi)進行細菌學檢查。
研究用的E. coli O157:H7標準菌株編號為ATCC 43895。研究者除采用了HiMedia出的HiCrome EC O157:H7 Selective agar(簡稱HEC)外,還采用了美國Biolog 產(chǎn)的Rainbow agar O157(簡稱RB)。該平板為無色,在上面E. coli菌落呈現(xiàn)紅紫藍黑等不同顏色,E. coli O157:H7呈現(xiàn)深灰色至深黑色。而其他葡萄糖醛酸酶陽性菌株呈現(xiàn)紅色或洋紅色菌落。該培養(yǎng)基添加有新生霉素和亞碲酸鹽。
研究遵循了2005年APHA指南,采用薄膜過濾法對E. coli O157:H7進行了檢測和計數(shù)。濾膜放置在培養(yǎng)基上,37℃倒置孵育24小時。對典型菌落計數(shù),單位為CFU/100 ml。菌落的進一步確證采用PCR法。終計算得出靈敏度(真陽性率)、特異性(真陰性率)、總有效率(即(真陽性+真陰性)×100/總數(shù)),并進行統(tǒng)計學分析(t檢驗)。
結果見表1、表2、表3和表4。
表1. 在不同培養(yǎng)基上,E. coli O157:H7標準菌株的菌落特征
菌株 | 培養(yǎng)基 | 陽性菌落 | 正確數(shù) (%) | 假陰性菌落 | 假陰性數(shù)(%) |
E. coli O157:H7 | HEC | 深紫/紫紅 | 30 (93.8) | 淡粉/淡紫 | 2(6.2) |
RB | 灰/黑 | 30 (93.8) | 不同顏色(如紅紫藍) | 2(6.2) |
表2. 非E. coli O157:H7菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落情況
菌株 | 培養(yǎng)基 | 真陰性結果 (%) | 假陽性結果(%) |
E. coli O157:H7 | HEC | 10 (100) | 0(0.0) |
RB | 9 (90.0) | 1(10.0) |
表3. 培養(yǎng)基分離標準菌株的有效性
HEC | RB | PCR | |
真陽 | 30 | 30 | 30 |
真陰 | 10 | 9 | 9 |
假陽 | 0 | 1 | 1 |
假陰 | 2 | 2 | 1 |
靈敏度 | 93.7% | 93.7% | 96.7% |
特異度 | 100% | 90% | 90% |
有效率 | 95.2% | 92.8% | 95.1% |
表4. 60個尼羅河水樣在不同培養(yǎng)基上E. coli O157:H7的假陽性率
分離株數(shù)量 | 假陽性數(shù)(%) | |
HEC | 80 | 5(6.25) |
RB | 80 | 8(10.0) |
可見,HiCrome EC O157:H7 Selective agar分離E. coli O157:H7具有更高的靈敏度和特異度,并已被PCR進一步確證。顯色培養(yǎng)基不失為一種靈敏、快速、特異的方法,并且無須任何確證試驗。
HiMedia公司是微生物產(chǎn)品生產(chǎn)商,具有40多年生產(chǎn)研發(fā)經(jīng)驗,具有WHO-GMP認證、ISO9001,ISO13485質(zhì)量體系認證和CE、FDA注冊登記。產(chǎn)品已行銷世界上140多個國家。
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