近年來,雙歧桿菌作為益生菌,越來越得到人們的重視。一方面,在生產中,需要進行雙歧桿菌的培養,另一方面,在酸乳等食品乳品中,又需要雙歧桿菌的計數。因為雙歧桿菌只有活菌數達到106 CFU/mL以上時,才能發揮正常生理功能;數量太少,則達不到保健的效果。
在培養雙歧桿菌時,需要了解雙歧桿菌為專性厭氧菌,適宜生長的環境pH值為6.7~7.0。它為革蘭氏陽性,無運動性,包括至少25個種,適合生長溫度在25℃-45℃。雙歧桿菌對碳水化合物的代謝終產物為乳酸和醋酸。
雙歧桿菌原本可以作為指示菌,因為它在糞便中出現的頻率非常高。有人研究發現,嬰兒出生后母乳喂養一周,腸道中雙歧桿菌數可占92%,而健康成年人僅有10%。但雙歧桿菌生長緩慢,且嚴格厭氧,培養很不方便,因此并沒有作為糞便的指示菌。
當今食品發展的趨勢是,應用雙歧桿菌越來越多,且乳桿菌與雙歧桿菌同時添加。這種混合發酵,多見于酸奶與保健品。在酸奶中,常應用嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌在牛奶中發酵 , 以使產品具有酸奶特有的細膩圓潤的凝乳狀態。而如果只單一使用雙歧桿菌發酵,則風味與口感不佳。但混合發酵也帶來一個問題,即給雙歧桿菌的計數帶來麻煩。一方面,雙歧桿菌與乳桿菌都屬于乳酸菌,性能接近,另一方面,雙歧桿菌隨著傳代次數增多,會發生變異成桿狀,因此通過鏡下形態鑒別不太可靠。如果能有一款商品化的雙歧桿菌顯色培養基,則可給雙歧桿菌的鑒別和計數帶來極大的便捷。
世界微生物培養基生產商HiMedia開發有一款雙歧桿菌顯色培養基(品名:HiCrome™
Bifidobacterium Agar),它可用于雙歧桿菌與乳桿菌混合發酵的酸乳等制品菌落的鑒別計數。該顯色培養基中含有特別蛋白胨、牛奶蛋白、氯化鈉、顯色劑和瓊脂。牛奶蛋白能檢測雙歧桿菌的酪蛋白水解活性,從而使菌落表現出光暈。顯色劑則可鑒別乳桿菌和雙歧桿菌。乳桿菌屬通常表現為綠色菌落和霧狀背景(發酵乳桿菌例外,菌落為粉色,無光暈),雙歧桿菌則根據物種不同,菌落顏色也有所區別:嬰兒雙歧桿菌表現為深藍色至藍綠色菌落。短雙歧桿菌表現為粉紅色菌落,并且有光暈。據了解,雙歧桿菌在成人體內的菌種主要是青春雙歧桿菌和長雙歧桿菌。在嬰兒為嬰兒雙歧桿菌和短雙歧桿菌。
圖. 右上為嬰兒雙岐桿菌ATCC 25962,左上為短雙歧桿菌ATCC 15698,下為植物乳桿菌ATCC 8014
雙歧桿菌在許多制品以及人和動物腸道內,大多與其他菌(如乳酸菌)混合生長,而且生長特點相近,很難區分。要對其進行計數,需設計特定的選擇培養基。雙歧桿菌顯色培養基一方面要求能保證雙歧桿菌的生長,同時要求選擇性高,對雜菌的抑制性強,雙歧桿菌菌落呈現顯著的顏色或形態上的特征。傳統培養雙歧桿菌培養時間較長,需要 96小時才能出結果,而該顯色培養基則只需在無氧條件下35-37℃孵育48小時,即可知道準確結果。顯色培養方法的特異性也很高,能夠保證培養結果的準確性。
HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養基能快速有效地檢測雙歧桿菌,這對于辨別產品中添加雙歧桿菌的數量具有重要意義。HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養基能實現一步培養直接計數,基本能夠滿足實驗室對雙歧桿菌初步檢測計數的需要,特別適合不擁有大型細菌鑒定儀的中小企業和第三方實驗室。
圖. 短雙歧桿菌
圖. 植物乳桿菌