顯色培養(yǎng)基的保存條件很苛刻,應該怎么保存
一般是在分離培養(yǎng)基中加入檢測某些菌種的特異性酶底物。該底物由產色基團和微生物可代謝物質組成,通常為無色。但在特異性酶作用下游離出發(fā)色基團并顯示一定顏色,直接觀察菌落顏色即可對菌種做出鑒定。
顯色培養(yǎng)基通常為干粉狀,容易保存。加蒸餾水溶解后,也無須高壓滅菌,煮沸即可倒平板,劃線接種,置適宜溫度下培養(yǎng)一定時間即可。培養(yǎng)時間依具體培養(yǎng)基而定,通常是18-24小時,比傳統(tǒng)時間顯著縮短。
顯色培養(yǎng)基是一類利用微生物自身代謝產生的酶與相應顯色底物反應顯色的原理來檢測微生物的新型培養(yǎng)基。這些相應的顯色底物是由產色基因和微生物部分可代謝物質組成,在特異性酶作用下,游離出產色基因顯示一定顏色,直接觀察菌落顏色即可對菌種作出鑒定。它是一種新型分離培養(yǎng)基,利用顯色培養(yǎng)基進行微生物的篩選分離,其反應的靈敏度和特異性大大優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)基。
有研究人員用7種干擾菌對傳統(tǒng)培養(yǎng)基和顯色培養(yǎng)基進行了測試,仍然發(fā)現(xiàn)顯色培養(yǎng)基的抗干擾能力更強,不過也同時指出,BS平板與顯色培養(yǎng)基搭配起來效果更好。
顯色培養(yǎng)基保存的步驟:
(一)準確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1NNaOH和1NHCl調節(jié)pH值到適宜范圍內。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
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